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Calculadora de concentración de ADN: de la absorbancia A260 a ng/µL y pureza A260/A280

Convierte la lectura A260 del espectrofotómetro en concentración de ADN o ARN (ng/µL), calcula el rendimiento total y revisa la pureza con la relación A260/A280.

Lectura A260

Factor de dilución

Ácido nucleico

Volumen de la muestra

Lectura A280 (opcional)

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Cómo funciona

Concentración (ng/µL) = A260 × factor de extinción × factor de dilución · Total (µg) = concentración × volumen ÷ 1,000 · Pureza = A260 ÷ A280

Los ácidos nucleicos absorben luz ultravioleta a 260 nm y, dentro del rango útil del equipo, la absorbancia es proporcional a la concentración (ley de Beer-Lambert). Una A260 de 1.0 equivale a unos 50 ng/µL de ADN de doble cadena, 33 ng/µL de ADN de cadena sencilla o 40 ng/µL de ARN, así que multiplicando la lectura por ese factor y por el factor de dilución obtienes la concentración de tu muestra original. La relación A260/A280 delata contaminantes: el ADN puro ronda 1.8 y el ARN puro 2.0, mientras que los restos de proteína o fenol la bajan.

Ejemplo resuelto

Después de una extracción, Diego diluye su ADN 50 veces y lee A260 = 0.25. La concentración es 0.25 × 50 × 50 = 625 ng/µL; en 100 µL de muestra hay 625 × 100 ÷ 1,000 = 62.5 µg. Si la A280 es 0.13, la relación A260/A280 es 0.25 ÷ 0.13 = 1.92: un ADN limpio.

Fuentes: Beer-Lambert law — Wikipedia

Preguntas frecuentes

¿Por qué se multiplica por 50 en el ADN?

Es el factor de extinción empírico: una muestra de ADN de doble cadena a 50 ng/µL, medida en una celda de 1 cm, da una A260 de aproximadamente 1.0. El ADN de cadena sencilla y el ARN absorben un poco más por unidad de masa, por eso usan 33 y 40.

¿Cuál es una buena relación A260/A280?

Alrededor de 1.8 para ADN puro y 2.0 para ARN puro. Un valor claramente menor que 1.8 sugiere contaminación con proteínas o fenol; uno muy alto puede indicar ARN en una extracción de ADN.

¿Necesito el factor de dilución?

Solo si diluiste la muestra antes de medirla. Si mediste la muestra sin diluir, pon 1. Si no, usa volumen total ÷ volumen de muestra; por ejemplo, 100 µL ÷ 2 µL = 50.

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Estimación con fines educativos, no es consejo médico ni de laboratorio: verifica las fórmulas, las unidades y los supuestos para tu protocolo.