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Calculadora de número de copias de ADN: de nanogramos a copias para qPCR

Convierte nanogramos de ADN (plásmido, genómico o amplicón) en número de copias según su longitud, o al revés, para preparar estándares y diluciones de qPCR.

Convertir

Masa de ADN

Copias deseadas (modo copias)

Longitud

Tipo de cadena

Volumen

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Cómo funciona

copias = masa (g) × Nₐ ÷ (longitud × 660 g/mol por pb); en cadena sencilla se usan 330 g/mol por nucleótido; Nₐ = 6.022 × 10²³

Un par de bases de ADN de doble cadena pesa en promedio 660 g/mol (como sal de sodio), así que la masa molar de cualquier fragmento es simplemente 660 × longitud. Divides la masa entre ese valor y multiplicas por el número de Avogadro para obtener el número de copias: es el cálculo detrás de cada curva estándar de qPCR y de la clásica pregunta «¿cuánto plásmido son 10⁸ copias?». Fíjate en lo pequeñas que son las cifras: una sola copia de un plásmido de 5 kb pesa unos 5.5 attogramos.

Ejemplo resuelto

Sofía tiene 10 ng de un plásmido de 5,000 pb disueltos en 50 µL. Su peso molecular es 5,000 × 660 = 3.30 × 10⁶ g/mol, así que 10 × 10⁻⁹ g × 6.022 × 10²³ ÷ 3.30 × 10⁶ = 1.82 × 10⁹ copias, es decir, 3.65 × 10⁷ copias por µL. Para llevarlo a 10⁶ copias/µL necesita una dilución de alrededor de 1 : 36.

Preguntas frecuentes

¿Uso 650 o 660 g/mol por par de bases?

Cualquiera de los dos da una diferencia menor de 2%. El valor de 660 corresponde a la sal de sodio y es el que usan la mayoría de las calculadoras; el peso exacto de cada secuencia varía un poco.

¿Importa si el plásmido está superenrollado?

No para convertir masa en copias, aunque los estándares superenrollados y los linealizados pueden amplificar de forma distinta en qPCR.

¿Cómo se calcula el número de copias de un plásmido?

Multiplica los gramos de ADN por 6.022 × 10²³ y divide entre la longitud en pb por 660. Por ejemplo, 1 ng de un plásmido de 3,000 pb son unos 3.04 × 10⁸ copias.

¿Cómo preparo una curva estándar para qPCR?

Calcula el volumen que contiene la cantidad de copias más alta que quieres y haz diluciones seriadas, normalmente de 1:10, hasta cubrir 5 o 6 órdenes de magnitud.

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