Calculadora de dilución de anticuerpos: cuánto anticuerpo y cuánto buffer poner
Calcula cuántos µL de anticuerpo y de buffer necesitas para tu western blot, inmunofluorescencia o citometría, por proporción (1:1000), por concentración (ng/mL a mg/mL) o por cantidad por prueba, con anticuerpo secundario, dilución intermedia y serie de titulación.
Cómo funciona
Volumen total = volumen por muestra × muestras × (1 + excedente) · Volumen de anticuerpo = volumen total ÷ factor de dilución · Factor = concentración del stock ÷ concentración de trabajo (C₁V₁ = C₂V₂) · Por prueba: concentración de trabajo = µg por prueba ÷ volumen de la prueba · Concentración final = stock ÷ factor
Las hojas técnicas de los anticuerpos indican una proporción (1:1000 en western blot, 1:100 a 1:1000 en inmunofluorescencia), una concentración de trabajo en µg/mL o ng/mL o, en citometría de flujo, una cantidad por prueba. Todo se reduce a un factor de dilución: el volumen total dividido entre ese factor es el volumen de stock, y el resto es buffer. Puedes escribir las concentraciones en mg/mL, µg/mL o ng/mL y el volumen por muestra en µL o mL. Si el volumen de stock queda por debajo de lo que pipeteas con precisión (alrededor de 1 µL), la calculadora propone una dilución intermedia de 1:10 a 1:1000. En Más opciones puedes preparar un anticuerpo secundario en el mismo volumen y ver cuántos ensayos rinde un vial y cuánto cuesta cada uno. La serie de titulación, a la mitad y al doble de la dilución, ayuda a optimizar un anticuerpo nuevo.
Ejemplo resuelto
Sofía va a incubar 12 membranas con 100 µL cada una y un 10% extra: 12 × 100 × 1.10 = 1,320 µL de solución. A 1:1000 necesita 1,320 ÷ 1,000 = 1.32 µL de anticuerpo en 1,318.7 µL de buffer; con un stock de 1 mg/mL la concentración final es de 1 µg/mL y un vial de 100 µL le alcanza para 75 ensayos. Si la hoja técnica pidiera 2 µg/mL, el factor sería 1:500 y usaría 2.64 µL de anticuerpo.
Fuentes: Thermo Fisher — Western blot antibody dilution calculator
Preguntas frecuentes
¿Puedo reutilizar el anticuerpo primario diluido?
Muchas veces sí, para 2 o 3 usos en un par de semanas a 4 °C con 0.02% de azida de sodio. No lo hagas con secundarios conjugados a HRP, porque la azida inhibe la HRP.
¿Con qué diluyo el anticuerpo?
Normalmente con BSA o leche al 5% en TBST para western blot, o con el buffer de bloqueo para tinciones. La leche enmascara los fosfoepítopos, así que usa BSA con anticuerpos fosfoespecíficos.
¿Cómo paso una dilución 1:1000 a µg/mL?
Divide la concentración del stock entre el factor: 1 mg/mL (1,000 µg/mL) a 1:1000 da 1 µg/mL. Si escribes la concentración del stock, la calculadora muestra la concentración final para cualquier proporción.
¿Qué hago si el volumen de anticuerpo es menor que 1 µL?
Prepara una dilución intermedia: diluye el stock 1:10 o 1:100 y usa 10 o 100 veces ese volumen. La calculadora elige la dilución intermedia y te da los dos pasos cuando el volumen queda por debajo de tu límite de pipeteo.
Calculadoras relacionadas
Con fines didácticos y de planeación: verifica los resultados con el protocolo de tu laboratorio y la documentación de tus equipos.