Calculadora de TCID50 (Spearman–Kärber y Reed–Muench)
Calcula el título viral en TCID50/mL a partir de un ensayo de dilución hasta el punto final con los métodos de Spearman–Kärber y Reed–Muench, con el log del título, el punto final del 50% y las UFP/mL estimadas.
Cómo funciona
Spearman–Kärber: log10 del punto final = x₁ − d/2 + d × Σ(positivos ÷ pocillos), donde x₁ = log10 del inverso de la primera dilución y d = paso de dilución en log10 · Reed–Muench: se interpola donde el % acumulado de infectados cruza el 50% · TCID50/mL = 10^punto final ÷ volumen de inóculo (mL) · UFP/mL ≈ 0.69 × TCID50/mL
La dosis infecciosa 50% en cultivo de tejidos (TCID50) es la dilución del virus que infecta a la mitad de los cultivos inoculados. Se inoculan pocillos replicados con una dilución seriada, se registra el efecto citopático de cada pocillo y se estima el punto final del 50%. El método de Spearman–Kärber suma la fracción infectada de cada dilución y es el más exacto de los clásicos cuando la primera dilución es totalmente positiva y la última totalmente negativa; el método de Reed–Muench (1938) interpola entre las diluciones a ambos lados del 50% con recuentos acumulados. Dividir entre el volumen de inóculo da TCID50 por mL. Según la distribución de Poisson, una TCID50 equivale a unas 0.69 unidades formadoras de placa (UFP).
Ejemplo resuelto
Ocho pocillos por dilución 1:10 desde 10⁻¹, inóculo de 0.1 mL, con 8, 8, 8, 6, 3, 0, 0 y 0 pocillos positivos. Σ fracción = 1 + 1 + 1 + 0.75 + 0.375 = 4.125, así que el punto final es 1 − 0.5 + 4.125 = 4.625 (10^−4.63). Por mL son 10^(4.625 + 1) = 4.22 × 10⁵ TCID50/mL (log10 5.63); Reed–Muench da 4.11 × 10⁵ y el título estimado es de 2.91 × 10⁵ UFP/mL.
Fuentes: Lei C et al. On the calculation of TCID50 for quantitation of virus infectivity. Virol Sin 2021;36:141–4 · Reed LJ, Muench H. A simple method of estimating fifty per cent endpoints. Am J Hyg 1938;27:493–7
Preguntas frecuentes
¿Qué es mejor, Spearman–Kärber o Reed–Muench?
Spearman–Kärber es estadísticamente más sólido y lo recomiendan revisiones recientes (Lei y cols., 2021); Reed–Muench sigue siendo muy usado. Ambos dan títulos parecidos cuando la serie va de pocillos totalmente infectados a totalmente sin infectar.
¿Cómo convierto TCID50 a UFP?
Multiplica las TCID50/mL por unos 0.69 (de la distribución de Poisson, ln 2 ≈ 0.69). Es una aproximación; la relación real depende del virus, la línea celular y el ensayo, así que haz un ensayo de placas si necesitas UFP exactas.
¿Cómo calculo la MOI a partir de un título TCID50?
Convierte a UFP/mL (× 0.69) y luego volumen de virus = MOI × número de células ÷ UFP/mL. La calculadora de MOI hace este paso.
¿Qué pasa si la primera dilución no es 100% positiva?
La fórmula de Spearman–Kärber supone que la serie empieza con todos los pocillos infectados. Si no es así, el título se subestima; repite el ensayo empezando con una muestra menos diluida.
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Esta calculadora tiene fines informativos. Verifica los resultados importantes antes de tomar decisiones.