Calculadora de cámara de Neubauer: conteo celular en células/mL

Cómo funciona

Células/mL = promedio por cuadro × factor de dilución ÷ volumen del cuadro (mL); en un cuadro grande de 1 mm² y 0.1 mm de profundidad es × 10⁴ · Dilución = (muestra + colorante) ÷ muestra × dilución previa · Viabilidad = vivas ÷ (vivas + muertas) × 100 · Células totales = células/mL × volumen · Volumen de siembra = células necesarias ÷ células/mL

Cada cuadro grande de una cámara de Neubauer mejorada mide 1 mm × 1 mm y el cubreobjetos queda a 0.1 mm, así que contiene 0.1 µL, una diezmilésima de mililitro. Por eso, el promedio de células por cuadro grande por 10,000 y por la dilución da las células por mililitro de la suspensión original. Si contaste cuadros más chicos (los 25 centrales que se usan para glóbulos rojos, los 16 subcuadros de las esquinas o los diminutos de 0.05 mm), la calculadora usa su volumen, y con la profundidad de la cámara puedes usar cámaras Fuchs-Rosenthal (0.2 mm) o Petroff-Hausser (0.02 mm). La dilución se puede escribir como factor o con los volúmenes que mezclaste: 10 µL de células más 10 µL de azul de tripano es un factor de 2, multiplicado por cualquier dilución previa. Si activas el conteo de vivas y muertas, escribe las células sin teñir y las azules cuadro por cuadro: la viabilidad es vivas ÷ (vivas + muertas), y la concentración y el volumen de siembra se calculan con las células viables. Cuenta las células que tocan las líneas superior e izquierda pero no las de abajo ni la derecha, busca entre 20 y 200 por cuadro grande y al menos 100 en total: el error de Poisson es 1 ÷ √N, cerca de ±10% con 100 células y ±5% con 400, y el coeficiente de variación entre cuadros indica si la suspensión estaba bien mezclada. El plan de siembra calcula cuánta suspensión tomar para uno o varios pozos y cuánto medio agregar para llegar al volumen final.

Ejemplo resuelto

Sofía cuenta 52, 48, 55 y 49 células en cuatro cuadros grandes (promedio 51) después de mezclar la muestra 1:1 con azul de tripano, así que el factor es 2. La concentración es 51 × 2 × 10⁴ = 1.02 × 10⁶ células/mL, y en sus 5 mL hay 5.1 × 10⁶ células. Para sembrar 1 × 10⁶ células toma 1 ÷ 1.02 = 0.98 mL (980 µL). Si además vio 4, 6, 3 y 5 células azules, la viabilidad es 51 ÷ (51 + 4.5) = 91.9%. Para seis pozos con 1 × 10⁵ células en 2 mL cada uno y 10% extra, toma 0.647 mL de suspensión y agrega 12.55 mL de medio.

Fuentes: ATCC — Animal cell culture guide (hemocytometer counting and trypan blue) · Hemocytometer.org — Hemocytometer calculation

Preguntas frecuentes