Calculadora de densidad de siembra celular: cuántas células sembrar por pozo o frasco
Calcula cuántas células sembrar por pozo, caja o frasco según células/cm², células por recipiente o % de confluencia, con los volúmenes de suspensión y medio para una mezcla maestra o por pozo, corrección por viabilidad, tabla para todos los formatos y curva de confluencia proyectada.
Cómo funciona
Células por recipiente = densidad (células/cm²) × área · densidad por % de confluencia = % × densidad en confluencia · células totales = células por recipiente × número × (1 + extra %) · volumen de suspensión = células totales ÷ (concentración × viabilidad) · mezcla maestra = medio por recipiente × número × (1 + extra %) · tiempo hasta la confluencia = latencia + tiempo de duplicación × log₂(densidad en confluencia ÷ densidad de siembra)
Sembrar por células por cm² hace que la confluencia llegue al mismo tiempo en cualquier formato: un pozo de una placa de 6 tiene unas 30 veces el área de uno de 96, así que necesita 30 veces más células. Puedes partir de una densidad, de las «células por pozo» de un protocolo o de la confluencia que quieres justo después de la adhesión (usando la densidad de tu línea al 100% de confluencia, unas 1.2 × 10⁵ células/cm² para HeLa). La calculadora te dice cuánta suspensión contada tomar, con un margen por pérdidas al pipetear, y prepara una mezcla maestra para repartir entre los pozos o te indica cuánta suspensión poner en cada pozo y cuánto medio agregar. Si tu conteo incluye células muertas, escribe la viabilidad para que el objetivo se cumpla con células vivas. La tabla muestra la misma densidad en todas las placas, cajas y frascos comunes, y la proyección usa el tiempo de duplicación para estimar cuándo llegará el cultivo a la confluencia.
Ejemplo resuelto
Luis siembra una placa de 6 pozos a 20,000 células/cm²: cada pozo de 9.5 cm² lleva 1.90 × 10⁵ células, y con 10% extra necesita 1.90 × 10⁵ × 6 × 1.1 = 1.254 × 10⁶ en total. Con una suspensión de 1.2 × 10⁶ células/mL toma 1.045 mL, los mezcla con 18.76 mL de medio para 19.80 mL de mezcla y reparte 3 mL por pozo. Siembra al 17% de una monocapa confluente de 1.2 × 10⁵ células/cm² y, con un tiempo de duplicación de 24 h, los pozos llegan a la confluencia en unos 2.6 días.
Fuentes: Thermo Fisher Gibco — Useful numbers for cell culture (vessel areas, seeding and confluent cell numbers) · NEB — How many cells should I seed into cell culture plates?
Preguntas frecuentes
¿Células por pozo o células por cm²?
Los artículos suelen dar células por pozo para un tipo de placa. Elige «Células por recipiente» y la placa que usaron para obtener la densidad, y luego cambia el recipiente para ver el número equivalente en tu formato, o búscalo en la tabla.
¿Cuánto medio pongo por pozo?
Los valores predeterminados son volúmenes de trabajo típicos (0.2 mL en placas de 96 pozos, 3 mL en placas de 6 y 12 mL en un T75). Si tu protocolo usa otro, escríbelo en Más opciones: la mezcla maestra y la concentración en los pozos se actualizan.
¿Mezcla maestra o suspensión directa en cada pozo?
La mezcla maestra (células diluidas en todo el volumen y luego repartidas) da pozos más parejos y conviene cuando el volumen de suspensión por pozo es pequeño. Poner la suspensión directamente en pozos que ya tienen medio es más rápido para pocos frascos; mezcla meciendo la placa, sin girarla, para que las células no se acumulen en el centro.
¿Cuántas células se siembran en un frasco T75?
Depende de la densidad: a 20,000 células/cm², un T75 de 75 cm² lleva 1.5 × 10⁶ células. Muchas líneas se resiembran a unas 2 a 3 × 10⁴ células/cm² y llegan a la confluencia en 3 o 4 días; revisa la recomendación del proveedor para tu línea.
¿Cómo se estima el tiempo hasta la confluencia?
Con la densidad de siembra, la densidad al 100% de confluencia y el tiempo de duplicación: en cada tiempo de duplicación el número de células se duplica, así que el tiempo es latencia + tiempo de duplicación × log₂(confluente ÷ siembra). Es una estimación: el crecimiento se frena cerca de la confluencia y después de un pase agresivo.
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Con fines didácticos y de planeación: verifica los resultados con el protocolo de tu laboratorio y la documentación de tus equipos.