Calculadora de actividad específica: unidades enzimáticas y U/mg desde la absorbancia

Cómo funciona

velocidad (M/min) = ΔA/min ÷ (ε × l); U = µmol/min = velocidad × volumen del ensayo; U/mL = U ÷ mL de enzima añadida; actividad específica = (U/mL) ÷ (mg/mL)

Una unidad enzimática (U) es la cantidad de enzima que transforma un micromol de sustrato por minuto en condiciones definidas. La ley de Beer-Lambert convierte la pendiente del espectrofotómetro en una velocidad molar; el volumen del ensayo la convierte en cantidad; y al dividir entre el volumen de enzima y la concentración de proteína obtienes las dos cifras que necesita toda tabla de purificación: U/mL y U/mg. La actividad específica sube conforme eliminas proteínas contaminantes, y su cociente frente al extracto crudo son las veces de purificación.

Ejemplo resuelto

Ana sigue la oxidación de NADH a 340 nm (ε = 6,220 M⁻¹cm⁻¹) y mide ΔA = 0.045/min en 1 mL de ensayo con 20 µL de enzima. La velocidad es 0.045 ÷ 6,220 = 7.23 µM/min, o sea 7.235 nmol/min = 0.0072 U. Por mL de muestra: 0.0072 ÷ 0.020 = 0.362 U/mL, y con 2.5 mg/mL de proteína la actividad específica es 0.362 ÷ 2.5 = 0.145 U/mg (2.41 nkat/mg).

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