🧬

Calculadora de ensayo de Bradford: curva estándar y concentración de proteínas

Arma la curva estándar de BSA con tus absorbancias, obtén el ajuste lineal y el R², y convierte la absorbancia de tus muestras en concentración de proteína con su dilución.

Concentraciones de los estándares (µg/mL)

Absorbancias de los estándares (A595)

Absorbancias de las muestras

Factor de dilución de la muestra

Volumen de muestra que tienes

Cargando calculadora…

Cómo funciona

Ajuste por mínimos cuadrados de los estándares: A = m × C + b; C de la muestra = (A − b) ÷ m × factor de dilución

En el ensayo de Bradford, el azul de Coomassie cambia de color en proporción a la proteína, pero solo es lineal en un rango limitado: más o menos de 100 a 1,000 µg/mL en el ensayo estándar y de 1 a 25 µg/mL en el microensayo. Ajusta una recta a los estándares, revisa el R² y lee solo las muestras que caen dentro de la curva; si alguna supera el estándar más alto, dilúyela y vuelve a medir. El colorante responde sobre todo a la arginina y a los residuos aromáticos, así que la BSA sobrestima algunas proteínas: si necesitas exactitud, usa la misma proteína como estándar.

Ejemplo resuelto

Ana prepara seis estándares de BSA de 0 a 1,000 µg/mL y obtiene la recta A₅₉₅ = 8.483 × 10⁻⁴ × C + 0.0059 (R² 0.9998). Su primera muestra, diluida 1:10, marca 0.312: en la cubeta hay (0.312 − 0.0059) ÷ 0.0008483 = 360.9 µg/mL, así que la muestra original tiene 3,608.8 µg/mL, es decir, 3.61 mg/mL. En sus 200 µL hay 721.8 µg de proteína.

Preguntas frecuentes

¿Tengo que restar el blanco?

Incluye el estándar de 0 en el ajuste: su absorbancia queda como la ordenada al origen. No lo restes dos veces.

¿Por qué mi curva se aplana en la parte de arriba?

Porque el colorante se satura. Quita los estándares más altos o diluye más la muestra para que las lecturas queden por debajo de 1.0 aproximadamente.

¿Qué R² es aceptable en una curva de Bradford?

Lo deseable es 0.99 o más. Si sale más bajo, revisa el pipeteo de los estándares, el tiempo de incubación y que las lecturas estén dentro del rango lineal.

¿A qué longitud de onda se lee el ensayo de Bradford?

A 595 nm, donde absorbe el complejo azul que forma el Coomassie G-250 al unirse a la proteína.

Calculadoras relacionadas

Calculadora de concentración de proteínas por A280

Convierte la absorbancia a 280 nm en concentración de proteína (mg/mL y µM) con ε (0.1%), E1% o ε molar + peso molecular, o con BSA, IgG y lisozima predefinidas, corrigiendo por dilución, paso óptico y línea base, con revisión de pureza A260/A280 y estimación de Warburg-Christian.

Calculadora de diluciones

Usa C₁V₁ = C₂V₂ para saber cuánta solución concentrada necesitas y cuánto disolvente agregar para lograr la concentración y el volumen que buscas.

Calculadora de coeficiente de extinción molar

Predice el coeficiente de extinción molar (ε₂₈₀) de una proteína a partir de su secuencia o de sus triptófanos, tirosinas y cistinas (Pace/ProtParam o Gill y von Hippel), con peso molecular, Abs 0.1%, valores oxidado y reducido, y la concentración a partir de la A280.

Calculadora de cuadro de Punnett

Cruza los genotipos de dos progenitores para un gen y obtén la proporción genotípica, la proporción fenotípica y la probabilidad de cada rasgo en la descendencia.

Herramienta con fines de enseñanza y planificación: confirma los resultados con el protocolo de tu laboratorio y la documentación de tus equipos.