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Calculadora de resuspensión de oligos (nmol a µM)

Calcula cuántos µL de agua o tampón TE añadir a un oligo o cebador liofilizado (nmol en la hoja de especificaciones) para un stock de 100 µM, sus ng/µL, µg totales y la dilución de trabajo de 10 µM.

Cantidad de oligo (según la hoja de especificaciones)

Concentración deseada del stock

Peso molecular (0 = omitir masa)

Concentración de trabajo

Volumen de trabajo a preparar

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Cómo funciona

volumen (µL) = nmol ÷ µM deseado × 1,000 · masa (µg) = nmol × PM ÷ 1,000 · ng/µL = µM × PM ÷ 1,000 · dilución de trabajo: stock (µL) = µM de trabajo × volumen de trabajo ÷ µM del stock

Los oligonucleótidos sintéticos llegan liofilizados y el rendimiento en nanomoles figura en la hoja de especificaciones. Como 1 µM es 1 pmol/µL, el volumen para un stock de 100 µM es simplemente nmol × 10 µL. Centrifuga el tubo antes de abrirlo, disuelve en agua libre de nucleasas o en TE con poco EDTA (pH 7.5–8, que conserva mejor los oligos), agita en vórtex y deja reposar unos minutos. La mayoría de los laboratorios guarda un stock maestro de 100 µM congelado y usa una dilución de trabajo de 10 µM para descongelar el maestro lo menos posible.

Ejemplo resuelto

Un oligo de 25.3 nmol resuspendido a 100 µM necesita 25.3 ÷ 100 × 1,000 = 253.0 µL de agua o TE. Con un peso molecular de 6,100 g/mol pesa 154.33 µg y el stock tiene 610.0 ng/µL. Para 100 µL de solución de trabajo a 10 µM, mezcla 10.00 µL del stock con 90.00 µL de agua.

Fuentes: IDT — Expert tips for resuspending and diluting oligos and primers · IDT — How to store oligonucleotides for greatest stability

Preguntas frecuentes

¿Cómo resuspendo cebadores a 100 µM?

Multiplica los nmol del tubo por 10 y añade esos µL: 25 nmol → 250 µL, 38.6 nmol → 386 µL. Usa agua libre de nucleasas o tampón TE, agita en vórtex, centrifuga y guarda a −20 °C.

¿Uso agua o tampón TE?

El TE (Tris 10 mM, EDTA 0.1–1 mM, pH 8) protege los oligos de la hidrólisis ácida y de las nucleasas durante el almacenamiento largo. El agua sirve para stocks de trabajo a corto plazo o cuando el EDTA afectaría a las enzimas posteriores.

¿Cómo convierto µM a ng/µL en un oligo?

ng/µL = µM × peso molecular (g/mol) ÷ 1,000. Un oligo de 20 bases de unos 6,100 g/mol a 100 µM tiene unos 610 ng/µL.

¿A qué concentración de trabajo dejo los cebadores?

Habitualmente a 10 µM, de modo que 1 µL en una reacción de 20–50 µL da 0.2–0.5 µM. Las sondas de qPCR suelen guardarse a 5–10 µM.

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