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Calculadora de concentración de ácidos nucleicos: de A260 a ng/µL y volumen a pipetear

Convierte la A260 de tu NanoDrop o espectrofotómetro en ng/µL de ADN, ARN u oligo, revisa la pureza 260/280 y 260/230 y calcula cuántos µL tomar para la masa que necesitas.

Ácido nucleico

Lectura de A260

Lectura de A280 (0 si no la tienes)

Lectura de A230 (0 si no la tienes)

Factor de dilución de la muestra medida

Masa que necesitas para el siguiente paso

Cargando calculadora…

Cómo funciona

Concentración (ng/µL) = A260 × factor de conversión (ADN doble cadena 50, ADN cadena sencilla 33, ARN 40) × factor de dilución · pureza = A260 ÷ A280 (≈ 1.8 ADN, ≈ 2.0 ARN) y A260 ÷ A230 (2.0–2.2)

Los ácidos nucleicos absorben la luz ultravioleta sobre todo a 260 nm por sus bases aromáticas. Con un paso óptico de 1 cm, una absorbancia de 1.0 equivale a unos 50 µg/mL de ADN de doble cadena, 40 µg/mL de ARN o 33 µg/mL de ADN de cadena sencilla; la diferencia se debe al apilamiento de bases, que reduce la absorbancia en la doble hélice. Basta multiplicar la lectura por ese factor y por la dilución. Las proteínas absorben a 280 nm y contaminantes como el fenol, la guanidina o el EDTA cerca de 230 nm, así que las relaciones 260/280 y 260/230 sirven como control rápido de pureza. Ojo: la absorbancia no distingue ADN de ARN ni material íntegro de degradado; para eso necesitas un gel o un ensayo fluorométrico.

Ejemplo resuelto

Luis mide en el NanoDrop un ADN de doble cadena sin diluir: A260 = 0.250, así que tiene 0.250 × 50 = 12.5 ng/µL. Con A280 = 0.135, la relación 260/280 es 1.85 (limpia), y con A230 = 0.120 la 260/230 es 2.08 (también limpia). Para poner 500 ng en una ligación necesita 500 ÷ 12.5 = 40.00 µL.

Preguntas frecuentes

¿Por qué el NanoDrop dice que 1.8 es puro, pero mi ARN da 2.0?

El ARN tiene más uracilo y estructura de cadena sencilla, así que el ARN puro ronda 2.0 y el ADN puro 1.8. Un ADN que marca 2.0 suele tener ARN contaminante.

¿La concentración por A260 es confiable en muestras muy diluidas?

Por debajo de unos 2 a 5 ng/µL (A260 menor de 0.05 a 0.1) la lectura está dominada por el ruido y el fondo del buffer. Para concentraciones bajas usa un ensayo fluorescente como PicoGreen o Qubit.

¿Cómo se calcula la concentración de ARN con la A260?

Multiplica la A260 por 40 y por el factor de dilución. Una A260 de 0.250 sin diluir equivale a 10.0 ng/µL de ARN.

¿Cuántos µL de ADN tengo que tomar para tener cierta masa?

Divide los nanogramos que necesitas entre la concentración en ng/µL. Con 12.5 ng/µL y 500 ng necesarios, tomas 40 µL.

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