Calculadora de transfección: ADN, reactivo y medio por pozo para tu mezcla maestra

Cómo funciona

ADN total = µg por pozo × pozos × (1 + excedente) · reactivo = ADN × relación (µL/µg) · volumen de stock = ADN ÷ concentración del stock · medio por tubo = volumen por pozo × pozos × (1 + excedente)

Los reactivos de lípidos catiónicos y de polímeros envuelven el ADN plasmídico, que tiene carga negativa, en complejos que las células internalizan. La cantidad de complejo que tolera un cultivo depende del área del pozo, por eso todos los manuales traen una tabla por formato de placa. La relación reactivo:ADN controla el balance de cargas: con poco reactivo el ADN no se empaqueta y con demasiado el lípido se vuelve tóxico. Preparar el ADN y el reactivo en tubos separados con medio sin suero antes de juntarlos evita que las proteínas del suero interfieran en la formación de los complejos.

Ejemplo resuelto

Luis va a transfectar 6 pozos de una placa de 6 con 2.5 µg de ADN por pozo, 3 µL de reactivo por µg y 10% de excedente (6.6 pozos equivalentes). Necesita 16.5 µg de plásmido, es decir, 16.5 µL de un stock de 1 µg/µL, en 825 µL de medio, y 49.5 µL de reactivo en otros 825 µL. Combina ambos tubos, espera de 15 a 20 minutos y añade 250 µL de complejo a cada pozo, sembrado el día anterior con 2.5–5 × 10⁵ células.

Preguntas frecuentes